| 菌液: |
请您最好提供200 μl 以上新鲜菌液,装在1.5 ml离心管中并用封口膜封好交给我们的工作人员或快递邮寄,或者提供4ml新鲜菌液,我们可直接进行质粒的提取。
我们的常规培养基为LB,培养温度为37℃,常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。您的样品如果需要特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液;如果使用特殊抗生素,请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。除此之外,您还可以提供平板菌、穿刺菌或者甘油菌。
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| 质粒: |
如果您的质粒纯度可以达到全自动测序的要求,即:OD260/OD280=1.6-2.0,也可以直接提供质粒。要求浓度要求>200ng/μl,提供10 μl 以上。
我们的常规培养基为LB,培养温度为37℃,常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。您的样品如果需要特殊培养要求,请您提供4ml新鲜菌液;如果使用特殊抗生素,请您一定提供储存液并告知浓度以及工作浓度。除此之外,您还可以提供平板菌、穿刺菌或者甘油菌。以下情况请您直接提供抽提好的DNA模板:
1. 噬菌体DNA
2. 低拷贝质粒
3. cosmid,BAC DNA
请您纯化DNA模板时注意:纯化的DNA模板要求纯度高。纯化以后的DNA模板要溶解于无菌去离子水。浓度要求>200ng/μl,(载体较大的,请提供>500ng/μl),提供10μl以上(一般情况下,经测序部检测合格后才可使用)。
无论您按照1或2提供菌液或质粒,请您务必写明:
1. 质粒的名称和详细图谱
2. 插入片段的大小和酶切位点
3. 选取的测序引物名称和序列,并且标明测序引物距离插入片段的位置(注:测序引物以后可能会有20-30个碱基不明晰)
4. 如果提供特殊测序引物,请写明序列,并且一定要提供经PAGE纯化的引物,浓度大于5pmol/μl
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| PCR产物: |
如果您提供的是PCR原液,我们将进行琼脂糖凝胶电泳纯化。回收后的产物无论测序成功与否,我们将收取一定的纯化费用,所以请您提供PCR原液时一定要进行鉴定。确信PCR产物为单一扩增条带,总量必须大于2μg,方可提供,以免耽搁您的实验。
如果您提供纯化好的PCR产物,条带必须单一,纯度OD260/OD280=1.6-2.0。最好溶解在灭过菌的去离子水中,浓度要求>50 ng/μl,提供10μl以上。同时请您提供PCR引物,并注明浓度,一定要提供经PAGE纯化的引物,浓度大于5pmol/μl。
注意事项:
1. PCR产物直接测序成功的关键是PCR产物的纯度,所以我们提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近,用电泳胶也无法分开,此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。
2. PCR产物直接测序成功的另一要因是引物,不能做PCR反应的引物便能测序。测序用引物要求较高,引物的3’端必须与模板完全其配,含有Mix碱基的引物一般不能测序(特别是3’端)。此外,测序引物长度一般为20个碱基左右,GC含量必须在50-60%左右。而且用于测序的引物一定要经过PAGE纯化,纯度必须大于90%。
3. 在PCR扩增时,难以扩增(扩增后的PCR带较弱)的PCR产物在测序时一般成功率较低。
4. 小于150bp的PCR产物直接测序效果不好,建议克隆后测序。
注:以下电泳图片均为2微升上样量。
1. PCR未纯化产物,如下图:

2. PCR纯化产物,如下图:
3. 质粒,如下图:
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| Cosmid中插入DNA片段的测序: |
请提供纯化后的Cosmid DNA大于5μg(因每个反应的用量需1μg以上)。DNA必须注明浓度,并请提供浓度(浓度必须正确)大于5pmol/μl的引物10μl以上。
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| 其它说明: |
客户在提供测序样品的同时,请注明用何种引物,测几个反应,是否测通,是单链测序还是双链测序等。
| 测序用引物说明 |
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1. 提供引物的序列,需要我们合成时,按30元/条进行收费
2. 自备引物时,请提供浓度(浓度必须正确)大于5pmol/μl的引物10μl以上,并注明引物序列
3. 注意引物长度宜在20个碱基左右,GC含量在50-60%左右。不要使用含有Mix碱基的引物,特别是3’端的3个碱基内不能含有Mix碱基
4. 引物必须经过PAGE纯化,纯度大于90% |
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